Un ensayo multipocillo basado en líquido para la detección de derribos de C. elegans

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga medios de agar previamente localizados con bacterias de ARNi, con o sin un inserto específico de gen dirigido a un gen de C. elegans .

Siembre gusanos sincronizados en etapa L1 en los pozos e incube para permitir la alimentación de las bacterias de ARNi.

El inserto produce ARN de interferencia que se dirige a genes específicos del gusano, generando un fenotipo de eliminación específico del gen.

Agregue tampón a los pocillos y vuelva a suspender suavemente los gusanos.

Transfiera la suspensión a una placa de pocillo profundo y deje que los gusanos se asienten por gravedad.

Retire el sobrenadante, reteniendo un poco de tampón.

Lave los gusanos con tampón, luego deseche el sobrenadante, dejando una pequeña cantidad de tampón.

A continuación, tome una placa de ensayo de varios pocillos que contenga bacterias patógenas.

Dispensar un número definido de gusanos de control y derribo en sus respectivos pocillos para permitir interacciones huésped-patógeno. Las bacterias patógenas secretan compuestos que inducen la mortalidad de los gusanos.

Comparar la mortalidad de los gusanos para evaluar el efecto de la eliminación de genes específicos en la super