Evaluación de la mortalidad inducida por bacterias patógenas en larvas de C. elegans

Comience con una bacteria patógena cultivada en agar.

Raspe las bacterias, suspélalas en un tampón y agregue un medio para mantener la viabilidad bacteriana.

Dispense la suspensión en una microplaca.

A continuación, tome cepas separadas de larvas de C. elegans , ya sea con mayor susceptibilidad a los patógenos o con mayor resistencia, y déjelas asentarse.

Retire el sobrenadante, vuelva a suspender las larvas en un medio nuevo y transfiéralas a la microplaca que contiene las bacterias.

Selle la microplaca con una membrana permeable al gas e incube. Las bacterias secretan metabolitos tóxicos que activan las vías del estrés y conducen a la muerte celular.

Lave los pocillos para eliminar las bacterias, agregue un tinte fluorescente impermeable a las células e incube.

El tinte penetra solo en las células larvarias muertas con membranas rotas y se une a sus ácidos nucleicos.

Lave para eliminar el exceso de tinte y obtenga imágenes de los gusanos teñidos con fluorescencia para evaluar la mortalidad en las cepas susceptibles y resistentes.

Para llevar a cabo un ensayo de eliminación de líquidos, use un raspador celular para eliminar la P. aeruginosa de una placa SK y resuspender la bacteria en apro