Cultivo y mantenimiento de bacterias que expresan ARNi
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:29 min. • September 26th, 2025
Comience con una placa que contenga bacterias que expresan ARN o ARNi precultivadas.
Estas bacterias transportan plásmidos que contienen un gen de resistencia a los antibióticos y un inserto de gen diana que produce ARN bicatenario o dsRNA para inhibir la expresión génica específica en el huésped.
Con un alfiler estéril, transfiera las colonias a una placa de pocillo profundo que contenga un medio suplementado con antibióticos.
Incube la placa agitando para un crecimiento bacteriano uniforme, donde los pocillos profundos proporcionan aireación.
El antibiótico elimina las bacterias que carecen del plásmido, asegurando que solo sobrevivan las bacterias portadoras de plásmidos.
Centrifugar la placa para separar las bacterias y desechar el sobrenadante.
Vuelva a suspender las bacterias en una solución salina tamponada para estabilizarlas.
Dispense las bacterias resuspendidas en una placa de pocillos múltiples que contenga un medio rico en nutrientes complementado con un antibiótico y un inductor.
El antibiótico selecciona bacterias portadoras de plásmidos, mientras que el inductor desencadena la expresión de dsRNA.
La placa sembrada con bacterias que expresan ARNi está lista para más ensayos.
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