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Microbiología
0 vistas • 2:14 min • September 26th, 2025
Comience con una cepa bacteriana bioluminiscente marina que lleve el operón de luminiscencia, que codifica la luciferasa y las enzimas necesarias para la síntesis de sustratos.
Raya la cepa en una placa de agar rica en nutrientes suplementada con agua de mar artificial para imitar la salinidad nativa y apoyar el crecimiento.
Incubar para obtener colonias discretas, luego aislar e inocular una sola colonia en un medio líquido que contenga agua de mar artificial.
Incubar con agitación para promover el crecimiento nocturno en la fase exponencial.
Transfiera un volumen definido del cultivo durante la noche a un medio fresco e incube para aumentar la densidad bacteriana.
A medida que la población se expande, las bacterias liberan autoinductores, moléculas de señalización que se acumulan y difunden en las células, donde se unen a los receptores intracelulares, activando el operón de luminiscencia.
Esta activación induce la expresión de luciferasa y la biosíntesis del sustrato.
La luciferasa cataliza la oxidación del sustrato, emitiendo luz azul verdosa.
Monitorear el cultivo para detectar bioluminiscencia como indicador de activación de operones de luminiscencia y emisión de luz en bacterias marinas.
Después de preparar los medios de acuerdo con el protocolo de texto, raye las cepas bioluminiscentes bacterianas en placas de agar de medio de agua de mar artificial e incube a 24 a 30 grados Celsius durante la noche.
Prepare un cultivo durante la noche inoculando 100 mililitros de medio de agua de mar artificial con una sola colonia de la placa. Luego incube el cultivo a 24 a 30 grados Celsius y 120 RPM durante la noche. Al día siguiente, inocular 800 mililitros de medio de agua de mar artificial con 8 mililitros de cultivo nocturno.
Incube las células bacterianas a 24 a 30 grados Celsius y 120 RPM y observe las células hasta que comiencen a brillar.
Este artículo demuestra el cultivo y la monitorización in situ de bacterias marinas bioluminiscentes para estudiar la activación del operón de luminiscencia mediada por la percepción de quórum. El protocolo permite la observación en tiempo real de la densidad celular y la emisión de luz, proporcionando información sobre la comunicación microbiana y la regulación génica.
El monitoreo en tiempo real de la activación del operón de luminiscencia en bacterias marinas proporciona una lectura directa y cuantitativa de la expresión génica mediada por el sistema de quórum. Esta capacidad permite la validación temprana de objetivos y la reducción de riesgos mecanicistas en estudios de comunicación microbiana y regulación génica. El enfoque respalda una confianza predictiva en la interrogación de vías metabólicas y en genómica funcional dentro de los procesos de descubrimiento.
Este método se integra en la continuidad del descubrimiento, desde la prueba inicial de hipótesis hasta el desarrollo de ensayos y la investigación traslacional en sistemas microbianos.
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Última actualización: 29 agosto 2026