Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:50 min. • September 26th, 2025
Comience con un cultivo de una especie bacteriana que codifique proteínas recombinantes marcadas con el péptido nucleante de vesículas, o VNp, un péptido corto que promueve la formación de vesículas.
Agregue un inductor al cultivo e incube. El inductor desencadena la expresión de proteínas.
VNp se incrusta en la membrana interna y promueve la curvatura de la membrana, encapsulando las proteínas marcadas con VNp en vesículas en ciernes.
Transfiera el medio rico en vesículas a un tubo. Centríquelo para separar el sobrenadante rico en vesículas.
A continuación, filtre el sobrenadante para eliminar los contaminantes residuales.
Luego, pase el filtrado a través de otro filtro de membrana para capturar vesículas en la superficie de la membrana.
Coloque la membrana en un plato y agregue solución salina tamponada con fosfato.
Separe suavemente las vesículas y transfiera la suspensión a un tubo limpio.
Sonicar la suspensión para alterar las membranas de las vesículas y liberar las proteínas.
Centrifugar el lisado para separar los fragmentos de membrana.
El sobrenadante resultante contiene proteínas recombinantes purificadas, listas para su análisis.
Induzca la expresión de proteínas recombinantes del
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