F Transferencia de plásmidos y selección dual de antibióticos en E. coli
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:30 min. • September 26th, 2025
Comience con células de E. coli de donantes que portan un plásmido F en el que un gen de transferencia se reemplaza por un gen de resistencia a los antibióticos.
Estas células también contienen un plásmido de rescate que codifica el gen de transferencia faltante.
Tome volúmenes iguales de células receptoras de E. coli con un gen de resistencia a antibióticos diferente en su ADN.
Mezcle ambos cultivos en medios nutritivos libres de antibióticos e incube sin agitar.
El plásmido de rescate de la bacteria donante expresa el gen de transferencia, lo que permite que la célula donante construya un F-pilus.
El pilus forma un puente entre dos células, permitiendo la transferencia unidireccional de plásmidos del donante al receptor, formando transconjugantes.
Agite la mezcla para interrumpir las parejas de apareamiento y colóquela en hielo para evitar que se aparee más.
Detecte el cultivo en placas de agar que contengan antibióticos seleccionables transconjugantes e incube.
Los transconjugantes, portadores de ambos genes de resistencia a los antibióticos, sobreviven y forman colonias en presencia de ambos antibióticos, lo que confirma la transferencia exitosa del plásmido F.
Por duplicado, alícuota 1
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