Cuantificación de la inactivación bacteriana inducida por la luz a través de la generación de especies reactivas de oxígeno
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:23 min. • September 26th, 2025
Comience con una mezcla de reacción tamponada que contenga L-metionina, un donante de electrones, nitro azul tetrazolio o NBT, un indicador redox, y mononucleótido de flavina o FMN, un fotosensibilizador.
Agregue esta mezcla a un tubo que contenga el gránulo bacteriano y el vórtice.
Transfiera la solución a un tubo de vidrio.
Ahora, irradie la mezcla con luz violeta para activar FMN, que acepta un electrón de L-metionina, formando un intermedio reactivo.
Este intermedio transfiere el electrón al oxígeno molecular disuelto, generando especies reactivas de oxígeno o ROS cerca de la superficie bacteriana.
El ROS resultante daña los componentes celulares y reduce la viabilidad bacteriana.
El ROS también reduce NBT a formazán, un producto de color azul que se deposita cerca de la superficie bacteriana.
Transfiera la mezcla a un tubo, centríquela y deseche el sobrenadante.
Vuelva a suspender el pellet en un disolvente orgánico para solubilizar el formazán.
Finalmente, mida la absorbancia para determinar la inactivación bacteriana inducida por la luz a través de la generación de ROS.
Prepare las muestras de Staphylococcus aureus como se describió anteriormente para obtener un gránulo celular. A 75
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos