JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 1:28 min • October 30th, 2025
Tome un cultivo de Corynebacterium glutamicum, transformado con un plásmido que lleva un gen reportero fluorescente aguas abajo del antiterminador del ácido ribonucleico o secuencia RAT, en una placa de pocillos múltiples.
Durante la transcripción, el RAT-ARN forma una estructura de bucle de tallo que bloquea la ARN polimerasa, deteniendo la expresión génica reportera.
El plásmido también expresa constitutivamente LicV, una proteína de fusión que comprende la proteína de unión al ARN RAT, LicT, y el dominio VVD sensible a la luz azul.
En la oscuridad, LicV permanece monomérico y no se une al bucle del tallo RAT-ARN, lo que bloquea la transcripción del gen reportero.
Ilumine el cultivo con luz azul para inducir un cambio conformacional en el dominio VVD, lo que desencadena la dimerización de LicV.
El LicV dimerizado se une al RAT-ARN, desplegando la estructura del bucle del tallo y permitiendo que la ARN polimerasa transcriba el gen reportero, produciendo la proteína reportera fluorescente.
Observe el cultivo bajo un microscopio de fluorescencia.
La fuerte fluorescencia reportera después de la iluminación con luz azul y la fluorescencia mínima en la oscuridad confirman el éxito del control optogenético.