JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:28 min • October 30th, 2025
Comience con un cubreobjetos de vidrio sembrado con un cocultivo de bacterias móviles marcadas con fluorescencia y bacterias inmóviles sin etiquetar.
Tome el plato que contiene una almohadilla de agarosa con infusión de nutrientes y retire con cuidado el molde de silicona circundante.
Incline el plato y use una espátula doblada para deslizarlo debajo del borde de la almohadilla. Luego colóquelo en la tapa de una placa de Petri.
Transfiera la almohadilla, con la parte inferior hacia abajo, al plato que contiene las células bacterianas para garantizar un contacto uniforme con la capa bacteriana.
Presione suavemente la almohadilla para eliminar las burbujas de aire.
Coloque las toallitas previamente humedecidas alrededor del borde del plato para mantener la humedad.
Bajo un microscopio invertido, rastree el comportamiento bacteriano durante un período de tiempo.
A medida que las bacterias crecen, las bacterias inmóviles liberan atrayentes químicos. Las bacterias móviles detectan estas señales y se mueven hacia las colonias bacterianas inmóviles.
Con el tiempo, las bacterias móviles se acumulan e invaden colonias bacterianas inmóviles, lo que confirma las interacciones bacterianas.
Una vez que las almohadillas estén secas, pipetee un microlitro de cocultivo de manera uniforme en el fondo de un cubreobjetos de vidrio estéril de 35 milímetros precalentado.
Retire el recorte de silicona del molde de agarosa con pinzas estériles, inclínelo hacia un lado y deslice una espátula ligeramente doblada debajo del borde de la almohadilla de agarosa para dejarla caer sobre una tapa de placa de Petri estéril.
Transfiera la almohadilla al plato con las células bacterianas, con la parte inferior hacia abajo, deslizando una espátula en ángulo de 90 grados debajo de la almohadilla y colocándola encima del cubreobjetos inoculado. Use la espátula para hacer que la almohadilla quede al ras contra la cubierta y presione suavemente las burbujas de aire.
Retire el exceso de humedad de la toallita húmeda y colóquela alrededor del borde del plato, asegurándose de que no toque la almohadilla. La muestra ahora está lista para la obtención de imágenes.