Enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas mediante separación de fases con detergente no iónico

Tome un lisado bacteriano que contenga proteínas hidrofílicas, lipoproteínas y agregados de proteínas.

Agregue un detergente frío no iónico capaz de separar las fases a temperaturas más cálidas.

Incubar en hielo y mezclar periódicamente. El detergente se une a la fracción lipídica de la lipoproteína, formando complejos proteína-detergente.

Caliente la mezcla para inducir la separación de fases. Las lipoproteínas se concentran en la fase detergente, mientras que las proteínas hidrofílicas permanecen en la fase acuosa.

Centrifugar a temperatura ambiente para mantener la separación bifásica.

Deseche la fase acuosa, agregue un tampón frío a la fase detergente y mezcle.

Repita el ciclo de enfriamiento, calentamiento y centrifugación para enriquecer las lipoproteínas.

Luego, agregue tampón frío y centrifugue a baja temperatura para granular los agregados no lipoproteicos.

Transfiera el sobrenadante a un tubo que contenga un disolvente precipitante de proteínas e incube a temperatura bajo cero para precipitar lipoproteínas.

Centrifugar a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante.

Las lipoproteínas precipitadas están listas para estudios posteriores.

Suplementar el sobrenadante con tensioactivo