Purificación de proteínas de dominio P recombinantes derivadas de bacterias de norovirus humanos

Tome una columna de cromatografía de exclusión de tamaño repleta de perlas de gel esféricas porosas.

Equilibre la columna con un tampón que preserve la integridad estructural de las proteínas durante la separación.

Cargue un extracto bacteriano purificado que contenga proteínas del dominio P del norovirus humano expresadas de forma recombinante e impurezas proteicas residuales.

Agregue el búfer para conducir el ejemplo a través de la columna.

Las grandes impurezas residuales no pueden entrar en los poros y pasar a través de los espacios entre las perlas, eluyéndolas primero.

Controle la elución mediante absorbancia UV. Un pequeño pico indica impurezas que salen de la columna.

Por el contrario, las pequeñas proteínas del dominio P ingresan a los poros de las perlas, viajan por un camino más largo y se eluyen más tarde. Un aumento en el pico de absorbancia indica la elución de las proteínas del dominio P.

Recolecte las fracciones eluidas que contienen las proteínas del dominio P, que ahora están listas para su posterior análisis.

Lave las bombas y tuberías del sistema de purificación de cromatografía líquida de alto rendimiento y preequilibre la columna de cromatografía de exclusión por tama