Purificación selectiva de una proteína bacteriana mediante cromatografía de intercambio iónico negativo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:28 min. • October 30th, 2025
Comience con una solución de resina de intercambio iónico que contenga grupos funcionales cargados positivamente para la unión selectiva de proteínas.
A continuación, tome un extracto de proteína obtenido de células bacterianas huésped diseñadas para sobreexpresar un factor de virulencia de la bacteria patógena Helicobacter pylori.
El extracto contiene el factor de virulencia objetivo junto con proteínas de la célula huésped en un tampón a pH 8.
Mezclar el extracto proteico con la resina e incubar con agitación para asegurar una interacción proteína-resina uniforme.
Las proteínas del huésped, que tienen puntos isoeléctricos más bajos que el pH del tampón, se cargan negativamente y se unen a la resina cargada positivamente.
La proteína diana, con un punto isoeléctrico cercano al pH del tampón, permanece en gran parte sin carga y permanece sin unir.
Transfiera la suspensión de proteína y resina a una columna de cromatografía y deje que la resina se asiente.
Recoja la fase líquida que contiene la proteína diana no unida.
Enjuague la resina con el tampón para asegurar la máxima recuperación de la proteína objetivo.
Para preparar 15 mililitros de resina DEAE, suspenda 0,6 gramos de polvo seco de
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