Un procedimiento para la purificación de una proteína marcada con polihistidina de Streptococcus mutans

Tome un cultivo de Streptococcus mutans que expresa una proteína marcada con polihistidina secretada en el medio.

Centrifugar el cultivo y recoger el sobrenadante rico en proteínas.

Agregue sulfato de amonio e incube agitando para precipitar las proteínas reduciendo su solubilidad.

Transfiera la solución a un tubo, centrífuga y deseche el sobrenadante.

Vuelva a suspender el gránulo en un tampón de unión que contenga sales y bajo imidazol para estabilizar la proteína.

Dializar la solución contra el tampón aglutinante fresco para eliminar el exceso de sales.

Centrifugar la solución dializada para granular los desechos insolubles, luego filtrar el sobrenadante.

Mezcle el filtrado con resina de afinidad cargada de níquel e incube para permitir la unión selectiva de la proteína marcada con polihistidina a los iones de níquel.

Cargue la mezcla en la columna de cromatografía y lave con tampón de unión para eliminar las proteínas no unidas.

A continuación, agregue un tampón de elución con alto imidazol para desplazar la histidina de los iones de níquel y liberar la proteína marcada con polihistidina.

Recoge este eluido que contiene las proteínas purificadas.

Centrifugar la suspensión de cultivo bacte