Medición de la unión de fármacos al caseum de lesiones tuberculosas mediante el método de diálisis de equilibrio rápido

Tome una suspensión homogénea de caseum, el material necrótico rico en lípidos de las lesiones tuberculosas, que alberga micobacterias tolerantes a los medicamentos en su núcleo.

Agregue el fármaco de prueba al homogeneizado y al vórtice para facilitar su interacción con la matriz caseum.

Coloque un inserto de diálisis de equilibrio rápido, que contenga cámaras donante y receptora separadas por una membrana semipermeable, en la placa base.

Cargue el homogeneizado enriquecido con fármaco en la cámara donante y agregue tampón a la cámara receptora.

Selle la placa e incube con rotación.

Durante la incubación, el fármaco libre se difunde a través de la membrana, alcanzando el equilibrio entre ambas cámaras.

Una vez alcanzado el equilibrio, diluya la muestra del donante con tampón y la muestra del receptor con homogeneizado sin fármaco para normalizar las condiciones de la matriz para la cuantificación del fármaco.

Finalmente, cuantifique la concentración del fármaco y calcule la fracción del fármaco no unido o fu.

El fu refleja el fármaco libre disponible para difundirse en caseum y llegar a las micobacterias tolerantes a los fármacos.

Agregue 6,5 microlitros del compuesto de prueba preparado a