Microscopía microfluídica de lapso de tiempo para estudiar la persistencia de antibióticos en bacterias
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 5:02 min. • October 30th, 2025
Comience con células bacterianas de crecimiento exponencial que expresan una proteína de fusión de unión al ADN marcada con fluorescencia para visualizar el nucleoide.
Agregue las células a las entradas de células de una placa microfluídica preparada previamente.
A continuación, introduzca medios que contengan antibióticos y medios libres de antibióticos en entradas de solución separadas.
Selle la placa, móntela en la platina del microscopio e inicie imágenes de lapso de tiempo.
Primero, cargue las células en la cámara de cultivo.
Luego, perfunda medios libres de antibióticos en la cámara para apoyar el crecimiento celular exponencial.
Finalmente, introduzca los medios que contienen antibióticos.
El antibiótico induce roturas de ADN de doble hebra, matando células susceptibles. Estas células exhiben nucleoides compactados y no replicantes con fluorescencia estable.
Vuelva a cambiar a medios libres de antibióticos para promover la recuperación.
Las células persistentes, una pequeña subpoblación que sobrevive al tratamiento con antibióticos, reanudan la replicación del ADN, se alargan y se dividen.
Esta recuperación conduce a un aumento de la fluorescencia en las células persistentes, lo que l
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