Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:09 min. • October 30th, 2025
Comience con un cultivo bacteriano y realice una dilución en serie para reducir la densidad celular.
Tome una pequeña alícuota de la dilución final y colóquela en una placa de agar.
Agregue perlas de vidrio estériles y agite suavemente la placa para asegurar la separación espacial de las células, lo cual es esencial para obtener colonias bien aisladas.
Retire las perlas de vidrio, luego invierta la placa e incube.
Las células individuales proliferan y forman colonias separadas, generando un cultivo monoclonal en el que cada colonia consta de una población bacteriana genéticamente uniforme.
Elija colonias individuales y transfiéralas a tubos separados que contengan un medio líquido.
Incube los tubos con agitación. Después de la incubación, evalúe la turbidez de cada cultivo.
Las células bacterianas suspendidas en el medio dispersan la luz, lo que hace que los cultivos parezcan más turbios con el aumento de la densidad celular.
Seleccione el tubo con la turbidez más alta, que indica la población bacteriana monoclonal más densa, para aplicaciones posteriores.
Etiquete las tres botellas preparadas con 100 mililitros de caldo LB Lennox con el número uno, el número dos y el número tres.
Pipetear 0,1 mililitros del cultivo bacteriano resultante en la botella uno. Tape la botella y gírela con la mano durante un minuto para obtener una solución homogénea. A continuación, pipetea 0,1 mililitros del frasco número uno al frasco número dos. Nuevamente, tape la botella y gírela con la mano durante un minuto. Realice la última dilución pipeteando 0,1 mililitros de la botella número dos en la botella número tres. Tapa la botella y agítala a mano durante un minuto.
Y luego pipetea 20 microlitros de la solución en cada una de las cuatro placas de Petri. Luego, coloque cuatro cuentas de vidrio de tres milímetros de diámetro esterilizadas en autoclave en cada una de las placas de Petri. Cierra las tapas de las placas de Petri y agítalas con la mano durante un minuto.
Cuando termine, dé la vuelta a las placas de Petri e incube las placas en una incubadora a 37 grados centígrados durante 24 horas.
Con una espátula de acero inoxidable, saque las bacterias monoclonales resultantes de las cuatro placas de Petri y colóquelas en los siete tubos restantes que contienen 12,5 mililitros de caldo LB Lennox. Deje los tubos en la incubadora de 37 grados centígrados durante 24 horas y luego elija el que tenga la mayor dispersión de luz utilizando el método colorimétrico visual.