Producción y deposición en aerosol de esporas de Bacillus subtilis

Comience con un cultivo de Bacillus subtilis, una bacteria formadora de esporas altamente resistente.

Inocular el cultivo en un medio limitado en nutrientes e incubar con aireación para inducir la esporulación.

Las células esporulantes producen esporas latentes con capas protectoras.

Transfiera el cultivo a un tubo y centrifugue para granular las esporas. Retire el sobrenadante que contiene las células residuales y los desechos.

Lave el gránulo con agua destilada estéril, repita la centrifugación y vuelva a suspender las esporas en agua estéril.

Usando un microscopio de contraste de fase, confirme la pureza de las esporas identificando las esporas brillantes y verificando la ausencia de contaminantes.

Realice diluciones en serie de las esporas, coloque en un plato de agar nutritivo e incube para permitir la germinación de esporas viables en colonias. Cuente las colonias para determinar la concentración de esporas.

En función de esta concentración, ajuste la cantidad de esporas y cargue la muestra diluida en una boquilla de aerosol. Rocíelo sobre una superficie de vidrio estéril donde la suspensión se seque rápidamente para formar una monocapa delgada y uniforme de esporas.

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