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Microbiología
0 vistas • 2:07 min • October 30th, 2025
Tome muestras separadas de células vivas y muertas de Microcystis aeruginosa .
Mezcle las muestras para crear una población combinada.
Microcystis contiene ficocianina, un pigmento autofluorescente que permanece intacto en las células vivas pero se degrada en las células muertas.
Agite la muestra para romper los grumos y generar una suspensión uniforme de una sola célula.
Agregue una sonda fluorescente de unión a ácidos nucleicos impermeable a la membrana celular e incube la muestra en la oscuridad para evitar el fotoblanqueo.
La sonda ingresa selectivamente a las células muertas a través de sus membranas dañadas y se une al ADN intracelular.
Pase la muestra a través de un citómetro de flujo para medir la autofluorescencia de ficocianina y la fluorescencia de la sonda de ácido nucleico utilizando láseres de longitud de onda de excitación apropiados.
Las células vivas emiten una fuerte autofluorescencia de ficocianina pero no muestran señal de sonda.
Por el contrario, las células muertas muestran una emisión reducida de pigmentos y una fluorescencia elevada de la sonda, lo que confirma el daño de la membrana.
Esto permite la identificación de las células vivas ricas en pigmentos a partir de las células muertas.
Para optimizar la absorción de células de sonda molecular, exponga la mitad del monocultivo previamente preparado a las condiciones adecuadas para generar un control muerto. Verifique las variaciones en el microambiente de la muestra para confirmar la muerte del cultivo. Y luego desagregar la formación de colonias como se acaba de demostrar.
A continuación, seleccione un láser de 488 nanómetros junto con un detector que pueda registrar la fluorescencia de las sondas de ácido nucleico verde y naranja. Y el láser de 640 nanómetros para registrar las señales de ficocianina a través de sus respectivos detectores.