Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:37 min. • October 30th, 2025
Tome un cultivo de Lactococcus lactis que exprese la peptidasa NisP unida a la membrana.
Mezcle el cultivo con un medio rico en nutrientes.
Agregue el agar fundido, mezcle y vierta en un plato para distribuir uniformemente L. lactis en el agar.
Una vez solidificado, perfore pozos en el agar.
A continuación, tome E. coli recombinante que produce variantes precursoras de tipo salvaje o modificadas del péptido antimicrobiano nisina.
Centrifugar para granular las bacterias, desechar los sobrenadantes y volver a suspender los gránulos en tampón.
Sonicar para lisar las bacterias, centrifugar y transferir los sobrenadantes a tubos frescos.
Normalice los lisados para igualar la densidad óptica utilizando tampón para garantizar niveles de péptidos constantes.
Pipetee cada muestra en pocillos de agar individuales e incube las muestras.
Durante la incubación, los péptidos precursores de la Nisina se difunden en el agar y son escindidos por NisP, generando nisina madura.
La nisina madura inhibe el crecimiento de L. lactis , formando halos claros alrededor del pozo.
Compare los tamaños de los halos para evaluar la actividad antimicrobiana de las variantes de nisina.
Agregue un mililitro de precultivo de La
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos