Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:48 min. • October 30th, 2025
La fibrosis quística (FQ) es un trastorno genético que causa una acumulación de moco espeso y pegajoso en los pulmones, formando esputo que favorece el crecimiento microbiano patógeno.
Para preparar esputo artificial de FQ, tome soluciones con propiedades bioquímicas clave.
La mezcla de mucinas contiene mucinas, que son glicoproteínas de alto peso molecular, para replicar la viscosidad del esputo de la FQ y promover la adhesión microbiana.
La mezcla química suministra iones y glucosa para apoyar el metabolismo microbiano.
La mezcla biológica proporciona nutrientes para el crecimiento microbiano.
Combine todo para formar el medio de esputo artificial (ASM).
Agregue un agente amortiguador para mantener un pH ligeramente ácido que favorezca la supervivencia de los patógenos.
Para la esterilización media, transfiera el ASM a una cámara de filtración al vacío con un filtro de membrana.
Filtre bajo agitación para evitar la agregación de mucina y evitar la obstrucción del filtro.
El vacío extrae el medio a través del filtro, eliminando contaminantes microbianos y agregados macromoleculares.
El ASM está listo para cultivar microbios asociados a la FQ.
Prepare un medio de esputo artificial agregando 250 mililitros de ASCM a la botella de 1 litro que contiene ASMM. Luego, agregue 250 mililitros de ASBM a la botella mediana. Valore el medio con un tampón MOPS básico de 1 molar para alcanzar un pH de 6,3 en un papel de pH.
Refrigere el medio de esputo artificial a 4 grados centígrados hasta que se filtre. Luego, para iniciar el proceso de filtración, transfiera 200 mililitros de medio de esputo artificial sin filtrar a un sistema de filtración al vacío con un filtro de tamaño de poro de 0,22 micrómetros. Después de conectar el sistema de filtración a la bomba de vacío, encienda la bomba de vacío. Luego, coloque la cámara en un agitador orbital, agitando a 90 rotaciones por minuto en una cámara frigorífica a 4 grados centígrados.
Cambie el filtro después de filtrar 350 mililitros de medio para superar el problema de obstrucción. Después de filtrar una cantidad considerable, agregue 150 mililitros adicionales de medio para la filtración. Repita la filtración con cámaras adicionales hasta que se filtre todo el medio.