Detección de los transportadores de metales de superficie en Neisseria gonorrhoeae mediante transferencia de puntos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:08 min. • November 5th, 2025
Comience con un cultivo de Neisseria gonorrhoeae cultivado en un medio sin metal.
La escasez de metales desencadena la expresión de transportadores de membrana externa que inician la absorción de metales cuando están disponibles.
Coloque una membrana de nitrocelulosa previamente empapada sobre papeles de filtro húmedos y ensamble el aparato de transferencia de puntos.
Detecte las células bacterianas y permita que el líquido se absorba.
Desmonte el aparato, retire la membrana y séquelo al aire.
Agregue un agente de bloqueo para evitar el enlace no específico.
Vuelva a insertar la membrana en el aparato, séllela con parafilm y vuelva a ensamblar.
Agregue un ligando de unión a metales derivado del huésped e incube agitando.
El ligando se une a los transportadores bacterianos.
Retire el líquido y lave la membrana para eliminar cualquier ligando no unido.
Agregue un anticuerpo primario específico del ligando, seguido de un anticuerpo secundario conjugado con enzimas y un reactivo de detección colorimétrica que forme un producto coloreado.
Una señal visible indica la expresión de transportadores de metales bacterianos en condiciones limitadas por metales.
Después de la incubación de duplicación masi
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