Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:51 min. • October 30th, 2025
Comience con una cepa de Haemophilus influenzae no tipificable, un patógeno del tracto respiratorio humano.
Estropee el cultivo bacteriano en medios selectivos ricos en nutrientes e incube en condiciones enriquecidas con CO2 para imitar el entorno del tracto respiratorio.
Durante la incubación, las bacterias utilizan nutrientes y se multiplican, formando colonias.
Transfiera una colonia a un medio líquido selectivo e incube para promover el crecimiento bacteriano en cultivo líquido.
Transfiera una alícuota a un tubo de microcentrífuga.
Centrifugar para separar las bacterias y desechar el sobrenadante.
Vuelva a suspender las bacterias en un tampón, centrifugue nuevamente para lavar y separar las bacterias y deseche el sobrenadante residual que contiene medios.
Vuelva a suspender las bacterias en el tampón y diluya.
Usando un espectrofotómetro, mida la densidad óptica a 600 nm para estimar la concentración bacteriana.
Coloque el cultivo bacteriano diluido en un medio selectivo e incube para formar colonias.
Cuente las colonias para calcular las unidades formadoras de colonias para preparar el inóculo para uso futuro.
Coloque el NTHI en un plato de agar de chocolate. Incube la placa boca abajo durante la noche a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono. Al día siguiente, cultive las bacterias en un caldo de infusión de cerebro y corazón.
Luego, en un tubo de microcentrífuga, agregue un mililitro del caldo. Centrifugar la mezcla a 4.000 g durante cinco minutos a temperatura ambiente. Luego, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en un mililitro de PBS. Repita este paso de lavado una vez más.
A continuación, diluya 100 microlitros de solución resuspendida en 900 microlitros de PBS y mida la absorbancia del cultivo a 600 nanómetros. Utilice esta información para ajustar el inóculo a 20 millones de UFC por mililitro.
A continuación, determine la viabilidad y las UFC del inóculo. Cultive de una a diez diluciones en serie del caldo en placas de agar chocolate e incube las placas durante la noche.