Recolección de líquido de lavado broncoalveolar de un modelo de ratón infectado con Haemophilus influenzae no tipificable

Comience con un ratón sacrificado con una tráquea expuesta. Los pulmones del ratón estaban preinfectados con Haemophilus influenzae no tipificable, una bacteria patógena.

Inserte un catéter en la tráquea y conéctelo a una jeringa llena de tampón de lavado.

Administre el tampón de lavado que contiene un anticoagulante para evitar la formación de coágulos sanguíneos y un azúcar para preservar la integridad celular.

Aspire suavemente para recuperar el líquido de lavado broncoalveolar que contiene glóbulos rojos, células inmunitarias y patógenos residuales.

Repita el procedimiento y agrupe el líquido de lavado recuperado en una sola suspensión.

Tome una alícuota de la suspensión acumulada y centrifugue para separar las celdas. Deseche el sobrenadante.

Vuelva a suspender las células en un tampón de lisis para lisar selectivamente los glóbulos rojos.

Centrifugar para separar las células restantes y desechar el sobrenadante que contiene los residuos.

Vuelva a suspender las celdas restantes en un búfer.

La suspensión final, que contiene células inmunitarias y bacterias residuales, está lista para su análisis posterior.

Exponga la parte ventral del pulmón para acceder a la tráquea. Intubar la tráquea con un catéter de calibre 20.

Usando el catéter, instilar 0,8 mililitros de tampón BALF y recoger el lavado por aspiración dental. Repita este procedimiento tres veces más, agrupando las cuatro colecciones de lavado en una sola suspensión.

Tome una alícuota de 100 microlitros y baje durante dos minutos a 2,000 RPM.

Retire el sobrenadante y vuelva a suspender en el tampón de lisis de glóbulos rojos. Gírelo hacia abajo y vuelva a suspender el gránulo con 1X PBS.