Sincronización de cultivos de cianobacterias y compactación del ADN impulsada por ciclos de luz y oscuridad

0 vistas3:17 min • October 30th, 2025

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Comience con una placa de agar rica en nutrientes suplementada con tiosulfato.

Raye las cianobacterias e incube bajo períodos alternos de luz y oscuridad para mantener el ciclo circadiano.

Durante el período de luz, la absorción de nutrientes y el tiosulfato favorecen el crecimiento bacteriano y la condensación del ADN.

En el período oscuro, las células conservan energía y se dividen.

El ciclo alterno de luz-oscuridad sincroniza las células con la misma etapa de crecimiento y división.

Después del período de luz, agregue una solución de sacarosa y pipetee repetidamente para liberar cianobacterias, lo que provocará un cambio de color. Transfiera las células a un tubo.

Agregue un tinte fluorescente específico para ADN e incube en la oscuridad. El tinte se une al ADN de las cianobacterias.

Centrifugar para separar las cianobacterias y eliminar el sobrenadante.

Vuelva a suspender las cianobacterias en una solución de sacarosa, transfiera la suspensión a un portaobjetos y cúbrala.

Bajo un microscopio de fluorescencia, el ADN condensado azul en las células confirma la progresión sincronizada y regulada por el circadiano del ciclo celular de las cianobacterias.

Comience con el cultivo de cianobacterias en placas BG-11 esterilizadas de nueve centímetros que contengan agar al 1,5% y tiosulfato de sodio al 0,3%. Incube las placas a 23 grados centígrados bajo un ciclo de luz de 12-12 con 50 micro-E de luz por metro cuadrado por segundo. Para mantener las células, transfiéralas a placas de agar BG-11 frescas semanalmente.

En una semana, los cultivos aparecen como bandas verdes. Transfiera los grupos verdes de células usando un lazo esterilizado con llama y colóquelos en la nueva placa. Para observar la compactación del ADN, recolecte las células cultivadas durante seis días al final del período de luz.

Para liberar las células de la placa, agregue un mililitro de sacarosa 0.2 molar. Luego, recoja la suspensión celular y repita la adición y eliminación de sacarosa hasta que la solución se vuelva verde. El cambio de color indica que la mayoría de las celdas se han liberado.

Ahora, transfiera 500 microlitros de solución de células suspendidas a un tubo Microfuge y agregue tinción de Hoechst para obtener una concentración final de un microgramo por mililitro. Luego, deje que las células se incuben en la oscuridad durante 10 minutos. A continuación, gire las células, deseche el sobrenadante y vuelva a suspenderlas en 10 microlitros de sacarosa 0,2 molares.

A continuación, transfiera un microlitro de la suspensión a un portaobjetos de vidrio, colóquelo en un cubreobjetos y observe las células bajo un microscopio de fluorescencia equipado con un filtro UV. Usando un objetivo de inmersión en aceite 100 veces, busque evidencia de compactación del ADN, que debería ser observable en la mayoría de las células.

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Última actualización: 15 agosto 2026