Síntesis de antígenos proteicos de membrana estabilizados con nanodiscos mediante un sistema libre de células
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:46 min. • September 26th, 2025
Tomemos un sistema libre de células bacterianas que carece de estructuras celulares intactas pero que conserva los componentes moleculares necesarios para la transcripción y traducción in vitro .
Introducir plásmidos que codifican el antígeno de la proteína de membrana y la proteína del andamio, junto con fosfolípidos y polímeros sintéticos.
Complemente la mezcla con ATP, GTP y una mezcla de aminoácidos para iniciar la síntesis de proteínas.
Simultáneamente, prepare una solución de alimento enriquecida con la mezcla de aminoácidos.
Cargue la mezcla en la cámara interior y la solución de alimentación en la cámara exterior de un dispositivo de diálisis de doble compartimento.
Durante la incubación, los sustratos se difunden desde la cámara externa a la interna a través de la membrana semipermeable, lo que facilita la transcripción de plásmidos y la traducción de proteínas.
La proteína andamio ensambla los fosfolípidos y polímeros en nanodiscos lipídicos y facilita el plegamiento y la incorporación de MPA en estas estructuras.
Los subproductos generados durante la reacción se difunden en la cámara exterior, manteniendo las condiciones óptimas para la formación de MPA estabilizados con nanodi
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