Western Blot para evaluar la integridad estructural de un antígeno de vacuna bacteriana

Tome un gel SDS-PAGE que contenga bandas de proteínas de partículas de nanolipoproteínas de membrana. Estos complejos transportan la proteína de membrana oligomérica de Chlamydia o MP, un antígeno de vacuna prometedor contra la infección por Chlamydia .

Utilice bandas de proteínas de MP oligomérico purificado como control.

Ensamble el gel, la membrana Western Blot y los componentes secantes en un sistema de transferencia en seco.

Aplique una corriente eléctrica para transferir las proteínas resueltas a la membrana.

Retire la membrana e incube en un tampón que contenga detergentes y anticuerpos primarios.

Los detergentes bloquean los sitios de interacción no específicos, mientras que los anticuerpos primarios se dirigen al MP.

Lave la membrana para eliminar los anticuerpos primarios no unidos.

Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos dirigidos a los anticuerpos primarios.

Lave la membrana para eliminar el exceso de anticuerpos secundarios.

Capture imágenes de fluorescencia de la membrana.

Las bandas moleculares que coinciden con el MP oligomérico de control confirman la integridad estructural del MP dentro de los complejos, lo que respalda su potencial antigénico.

Resuel