JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:15 min • September 26th, 2025
Los plastoglóbulos son gotas ricas en lípidos en el citoplasma de las cianobacterias.
Almacenan lípidos neutros dentro de un núcleo hidrofóbico, rodeado por una monocapa lipídica anfipática con proteínas estructurales y enzimáticas incrustadas. Los lípidos almacenados se movilizan durante el estrés para apoyar las funciones celulares.
Para aislarlos, comience con una fracción de plastoglobulo cruda obtenida de cianobacterias. Esta fracción está enriquecida en plastoglóbulos e incluye algunas proteínas contaminantes residuales.
Mezcle esta fracción con una solución de sacarosa más densa y transfiérala a un tubo de ultracentrífuga.
Superponga con una solución de sacarosa más ligera para crear un gradiente de densidad discontinuo.
Centrífuga a alta velocidad en condiciones de frío para evitar la degradación térmica de los plastoglóbulos.
El gradiente separa los componentes por densidad: los plastoglóbulos ricos en lípidos y baja densidad flotan hacia la parte superior, mientras que los contaminantes más densos y ricos en proteínas se hunden.
Recoja los plastoglóbulos purificados y congélelos rápidamente en un medio de congelación para preservar su estructura.
Almacene a temperaturas ultrabajas para uso a largo plazo.
Para cosechar plastoglóbulos puros de cianobacterias, cree un gradiente de sacarosa, como se mencionó anteriormente, utilizando 500 microlitros de plastoglóbulos crudos, 750 microlitros de medio R 0.7 y 750 microlitros de medio R 0.2. Después de la centrifugación, recoja los plastoglóbulos puros en un tubo de 1,5 mililitros y alícuotas los plastoglóbulos puros. Una vez hecho esto, congele rápidamente las alícuotas de plastoglóbulos puros en nitrógeno líquido y guárdelas directamente a menos 80 grados centígrados o liofilice hasta obtener un polvo seco.