Cuantificación de la polaridad y la dinámica de un componente del sistema de secreción en Legionella pneumophila

Comience con Legionella pneumophila, un patógeno respiratorio que expresa un componente del sistema de secreción marcado con fluorescencia necesario para la infección del huésped.

Para cuantificar la polaridad de estos componentes, adquiera imágenes de fluorescencia y ajuste el contraste para distinguir las células individuales.

Coloque regiones rectangulares desde el polo celular hacia el citoplasma para medir los gradientes de fluorescencia.

Enmascare estas regiones para extraer la intensidad media y la varianza, luego calcule las puntuaciones de polaridad como relaciones de varianza a intensidad media.

Las puntuaciones de polaridad altas indican un reclutamiento dirigido de componentes en los polos bacterianos.

Para mediciones dinámicas, capture dos imágenes de lapso de tiempo y ajuste el contraste para visualizar las celdas con claridad.

Coloque regiones cuadradas en el centro de la célula para medir la fluorescencia citosólica.

Enmascare celdas enteras para corregir el fotoblanqueo y defina regiones de fondo entre celdas para la sustracción de ruido.

Exporte todas las intensidades y calcule el cambio en la fluorescencia a lo largo del tiempo.

El aumento de la intensidad indica agrupaci