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Microbiología
0 vistas • 2:03 min • October 30th, 2025
Comience con un cultivo de Legionella pneumophila, una bacteria patógena.
Estas células bacterianas poseen un sistema de secreción en su membrana, que es esencial para la infección del huésped.
Suspenda las células bacterianas en agua estéril para lograr la densidad requerida para las imágenes de tomografía electrónica criogénica (crio-ET).
Agregue nanopartículas de oro, que sirven como puntos de referencia para la alineación de imágenes durante la reconstrucción tridimensional.
Tome una rejilla con una película de carbono perforada para depositar la muestra bacteriana.
Coloque la rejilla dentro de una cámara llena de gas y aplique una descarga eléctrica para hacer que la superficie sea más hidrófila.
Aplique la suspensión a la rejilla, permitiendo que el líquido se extienda uniformemente por la superficie y que las células se asienten.
Retire el exceso de agua de la rejilla y sumérjala en un medio de congelación líquido para congelar la muestra y preservar su arquitectura celular.
La muestra ahora está lista para la obtención de imágenes crio-ET del sistema de secreción bacteriana.
Para preparar la muestra de criotomografía electrónica, cultive un parche pesado de Legionella Pneumophila en placas de CYE-agar-estreptomicina durante 48 horas a 37 grados Celsius.
Vuelva a suspender las celdas en agua a un OD600 de aproximadamente 0,7. Luego agregue cinco microlitros de partículas de oro coloidal a 20 microlitros de la suspensión celular. Descargue una rejilla de carbón agujereada y pipetee cinco microlitros de la mezcla celular en ella.
Déjalo reposar durante un minuto. Seque la rejilla con papel de filtro y congélela en etano líquido utilizando un aparato de émbolo accionado por gravedad.