Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:48 min. • October 30th, 2025
Tome un tubo que contiene un cultivo de Vibrio natriegens, una bacteria de rápido crecimiento.
Centrifugar el cultivo para granular las bacterias. Deseche el sobrenadante que contiene el medio residual.
Vuelva a suspender el gránulo bacteriano en un medio nuevo y transfiéralo a un matraz cónico que contenga el mismo medio para la preparación del cultivo bacteriano.
Incube el cultivo agitando en condiciones aireadas.
Debido a un corto tiempo de generación, Vibrio natriegens utiliza nutrientes y se divide rápidamente para generar una población bacteriana concentrada.
Usando un espectrofotómetro, controle regularmente la densidad óptica (OD) para determinar la concentración bacteriana.
Cultive el cultivo hasta que la OD alcance aproximadamente uno, lo que indica una fase de crecimiento exponencial con alta actividad metabólica.
Transfiera el cultivo a tubos de centrífuga.
Centrifugar a baja temperatura para separar las bacterias preservando la integridad celular.
Coloque el tubo sobre hielo y retire el sobrenadante que contiene desechos celulares.
Almacene el gránulo bacteriano a temperatura ultrabaja para su análisis posterior.
Para comenzar, lave un mililitro del cultivo nocturno de Vibrio natriegens centrifugándolo en una centrífuga de sobremesa a 10,600 veces g durante un minuto.
Aspire el sobrenadante sin alterar el sedimento y vuelva a suspender en un mililitro de medio LB-V2 fresco. Inocular un mililitro de cultivo lavado durante la noche en un litro de medio de crecimiento LB-V2 fresco en un matraz Erlenmeyer de 4 litros con deflector esterilizado en autoclave con cubierta estéril para lograr una proporción de dilución de uno a mil. Cultiva a 30 grados centígrados mientras agitas a 225 RPM.
Use un espectrofotómetro para monitorear el OD 600 del cultivo, y cuando alcance 1.0 más o menos 0.2, coseche el cultivo centrifugándolo en dos tubos de 500 mililitros a 3,500 veces g durante 20 minutos a cuatro grados Celsius, y luego colóquelo en hielo. Aspire el sobrenadante y procese el gránulo inmediatamente.