Preparación de extracto celular crudo de Vibrio natriegens

Tome una suspensión de Vibrio natriegens, que tiene una alta tasa de síntesis de proteínas, en un tampón refrigerado para evitar la degradación celular.

Centrifugar en condiciones de frío.

Deseche el sobrenadante para eliminar los contaminantes.

Vuelva a suspender el pellet en un pequeño volumen de tampón refrigerado.

Con una punta de gran diámetro, transfiera la suspensión a un tubo de microcentrífuga para evitar el cizallamiento mecánico.

Mezcle la suspensión y coloque el tubo en un soporte colocado sobre hielo.

Baje la punta del sonicador a la suspensión.

Iniciar la sonicación para alterar la membrana celular y liberar el contenido citoplasmático.

Centrífuga para separar los restos celulares insolubles.

Recoja el sobrenadante o el extracto celular crudo que contiene contenido citoplasmático en un tubo nuevo.

Congele rápidamente el extracto celular en nitrógeno líquido para preservar su bioactividad.

Almacenar a temperaturas ultrabajas para su uso posterior en la expresión de proteínas libres de células.

Enfríe el tampón de lisis S30 recién preparado pH 7,7 a aproximadamente cuatro grados centígrados, use 10 mililitros de este tampón de lisis S30 frío para volver a suspender todos los gránul