Expresión de proteínas libres de células utilizando un extracto celular crudo bacteriano
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:32 min. • October 30th, 2025
Un sistema de expresión de proteínas libres de células utiliza un lisado celular crudo bacteriano, que contiene la maquinaria molecular esencial para la transcripción y traducción in vitro.
Este lisado incluye factores de transcripción, ribosomas y ARN de transferencia (ARNt).
Agregue una mezcla que contenga una plantilla de ADN, la ARN polimerasa, nucleótidos y aminoácidos al lisado.
Transfiéralo a una placa de PCR y centrífuzcalo para recoger el líquido adherido a las paredes. Selle la placa para evitar la evaporación.
Incubar en un termociclador a una temperatura óptima para apoyar la expresión de proteínas libres de células.
El factor de transcripción se asocia con la ARN polimerasa para formar un complejo que se une al ADN molde.
Este complejo cataliza la síntesis de ARN, incorporando nucleótidos para generar un ARN mensajero (ARNm).
El ARNm recluta ribosomas, que inician la traducción, durante la cual los ARNt entregan los aminoácidos correspondientes para formar una cadena polipeptídica.
El polipéptido se pliega en una proteína funcional, lista para aplicaciones posteriores.
Para realizar la expresión de proteínas libres de células utilizando una plantilla de ADN, descongele la mezcl
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