Transformación natural y expresión de GFP en la cianobacteria filamentosa Phormidium lacuna

Tome un cultivo de Phormidium lacuna, una cianobacteria filamentosa.

Homogeneizar el cultivo para dispersar los filamentos, luego centrifugar para granular las bacterias.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en un medio rico en nutrientes.

Agregue ADN plasmídico que contenga proteína fluorescente verde y genes de resistencia a los antibióticos en una placa de agar suplementada con antibióticos.

Agregue la suspensión bacteriana sobre el ADN e incube en condiciones de luz.

Las bacterias internalizan el ADN utilizando pili tipo IV. Los genes introducidos se integran en una de las múltiples copias del genoma bacteriano.

Redistribuya las bacterias en una placa de agar suplementada con antibióticos para seleccionar las bacterias transformadas.

Bajo un microscopio óptico, identifique filamentos verdes sanos que indiquen una transformación exitosa.

Transfiera los filamentos seleccionados a medios líquidos con una mayor concentración de antibióticos para enriquecer la población transformada.

Nuevamente, colóquelos en agar con niveles más altos de antibióticos para segregar transformadores.

Visualice la expresión de GFP bajo un microscopio de fluorescencia para confirmar una transfo