Imágenes bioluminiscentes de la progresión del tumor de mama en un modelo de ratón hembra

Comience con un ratón hembra inyectado con células tumorales de mama que expresan luciferasa.

Las células tumorales proliferan en el lugar de la inyección y se convierten en un tumor primario.

Coloque el ratón en una cámara de imágenes con un flujo anestésico para anestesiar al ratón.

Luego, inyecte luciferina, un sustrato para la luciferasa, en el ratón anestesiado.

La luciferina circula y entra en las células tumorales, reaccionando con la luciferasa para emitir bioluminiscencia.

Usando el sistema de imágenes, capture la señal de bioluminiscencia del ratón.

Con el tiempo, el tumor progresa en el sitio primario y hace metástasis a los pulmones.

Adquiera la imagen del mouse a intervalos regulares y defina las regiones de interés.

Con base en las intensidades de bioluminiscencia, construya la cinética de crecimiento tumoral para ambos sitios.

Con el tiempo, un aumento constante de la señal en el sitio del tumor primario indica una proliferación tumoral continua.

Sin embargo, un fuerte aumento de la bioluminiscencia pulmonar en puntos temporales posteriores sugiere metástasis de células tumorales.

Para comenzar, mantenga la línea celular 4T1 en el medio Eagle modificado o DMEM de Dulbecco suplementado. Incube las células a 37 grados centígrados en una atmósfera humidificada que contenga un 5 por ciento de dióxido de carbono.

Transfecte la línea celular 4T1 con el gen Luc2 para expresar luciferasa, una enzima bioluminiscente que se produce constitutivamente. Incube las células para mantenerlas listas para la inyección en ratones.

Cinco minutos después de anestesiar y preparar a un ratón hembra Balb-C, inyecte 2 veces 10 a la potencia cinco células 4T1 que expresan luciferasa por vía subcutánea en el dorso izquierdo con una jeringa de insulina de 1 mililitro. Aloje al animal durante 4 semanas después de la inyección.

Para obtener imágenes, coloque el ratón anestesiado en una posición dorsal recostada dentro del área designada del equipo de imágenes bioluminiscentes. Inyectar al ratón por vía intraperitoneal 100 microlitros de solución de D-luciferina a una concentración de 15 miligramos por mililitro.

Para ajustar los parámetros de imagen, configure el filtro de emisión abierto sin excitación, agrupando en 8, F-Stop en 2 y el tipo de campo de visión en D. Capture 20 imágenes bioluminiscentes durante 20 minutos para cada animal en cada punto final de imagen, asegurando que las imágenes representen una integración de señal de 60 segundos.

Usando el software del equipo, defina regiones específicas de interés para distinguir entre el tumor primario y las señales de metástasis pulmonar. Identificar señales bioluminiscentes en el lugar de la inyección y en la región torácica donde se produce la metástasis. Calcule la progresión tumoral en función de las intensidades de señal bioluminiscente.

Con imágenes recopiladas semanalmente, construya un perfil cinético de crecimiento para representar los cambios en la intensidad de la señal a lo largo del tiempo tanto en el tumor primario como en los sitios metastásicos. Compare las tendencias de intensidad de la señal para analizar la progresión tumoral y la metástasis.