Ensayo fluorescente de alto rendimiento para estudiar las interacciones microbio-gusano

Comienza con un tubo que contiene gusanos C. elegans .

Transfiere los gusanos a una placa multipozo con un medio de agarosa rico en nutrientes que contenga la bacteria de control o la bacteria de prueba.

Durante la incubación, los gusanos ingieren bacterias, que colonizan el epitelio intestinal y liberan aminoácidos que sirven como fuente de nutrientes. Estos aminoácidos se metabolizan en derivados de aminoácidos y se almacenan en gránulos intestinales relacionados con los lisosomas.

A continuación, añade un nuevo tampón y transfiere los gusanos a una placa negra de ensayo multipozo.

Añade un inductor químico de estrés a cada pozo y sella la placa.

Coloca la placa en un lector de placas de fluorescencia y registra la fluorescencia.

En los gusanos, el inductor de estrés provoca estrés oxidativo, que daña las células epiteliales intestinales.

Esto provoca que los gránulos intestinales relacionados con los lisosomas se rompan, liberando derivados de aminoácidos que, al exponerse a la luz ultravioleta, se fluorescen en azul.

Comparar la fluorescencia de los gusanos expuestos a las bacterias de control y de prueba para evaluar la eficiencia de colonización bacteriana y su impacto en la respuest