Preparación de una placa microfluídica con células bacterianas

Tomemos una placa microfluídica que contiene pares de pozos de entrada y salida conectados por canales microfluídicos, que incluyen canales serpentinos y un canal experimental.

Para preparar los canales, añade medios a la salida de forma adecuada.

Coloca el plato en una etapa de placas y séltalo con una cubierta esterilizada.

Activa el flujo de medios desde el pozo de salida al pozo de entrada para eliminar cualquier bolsa de aire atrapada dentro de los canales.

Quita el plato. Descarta el medio residual del pozo de salida y añade un cultivo bacteriano.

Al pozo de entrada, añade medios frescos para evitar el reflujo de aire. Coloca el plato de nuevo en el escenario.

Mientras observas bajo el microscopio, reanuda el flujo para atraer las células hacia el canal experimental.

Ajusta el caudal para evitar la entrada de celdas en los canales serpentinos y evitar obstrucciones.

Detener el flujo e incubar para facilitar la inserción bacteriana.

Retira la placa y descarta el cultivo bacteriano y el medio residual.

Las bacterias dentro de la placa microfluídica están ahora listas para más experimentos.

Para imprimar, primero retira la placa microfluida de 48 pozos del envase, sin tocar la superficie del vidrio en la parte inferior de la placa, y limpia la lámina de vidrio en la parte inferior de la placa con un papel de lente. Para cebar los canales microfluídicos, califique 200 microlitros a 37 grados Celsius con medio mínimo en el pozo de salida, teniendo cuidado de evitar burbujas. Luego coloca el plato sobre el escenario del plato.

Limpia la interfaz con etanol, sellándola en la etapa de placa una vez que el etanol se haya secado. En modo manual del módulo de control, ajusta el fluido como caldo Luria-Bertani a 37 grados Celsius, y el corte máximo a cinco dyne por centímetro cuadrado. Haz clic en los pozos de salida para activar el flujo de salida al pozo de entrada, para cebar los canales.

Tras cinco minutos, pausa el flujo para prepararte para la siembra y retira cuidadosamente la placa del escenario. Luego, aspirar cualquier medio residual del pozo de salida sin extraer ningún medio del círculo interior que conduzca a los canales microfluídicos. Para sembrar los canales experimentales, añadir 300 microlitros de medio mínimo al pozo de entrada, seguido de la adición de 300 microlitros de cultivo bacteriano al pozo de salida.

Devuelve la placa a la fase de imagen, asegurándote de limpiar la interfaz con etanol antes de colocarla sobre la placa, y utiliza la transmisión en directo de la cámara para enfocar en un solo canal. Mientras se monitoriza visualmente la transmisión en vivo, reanuda el flujo a 1 a 2 dyne por centímetro cuadrado durante aproximadamente 2 a 4 segundos, para permitir que las células entren en el canal experimental pero no en los canales serpentinos, y dejar la placa en el escenario de control de temperatura durante una hora, para permitir que las células se unan. Al final del periodo de inserción, retira cuidadosamente la placa de la etapa y aspira las bacterias del pozo de salida sin alterar el canal.

Luego, usa una nueva punta de pipeta para extraer el medio de los pozos de entrada.