Extracción de bacterias apoplásicas usando un método de presión basado en jeringuilla

Toma una planta de Arabidopsis con hojas pre-inoculadas con bacterias para estudiar la interacción planta-microbio.

Estas bacterias proliferan en el apoplasto, el espacio intercelular entre las células vegetales, formando microcolonias.

Una vez establecida la colonización apoplásica, extirpe las hojas y colócalas en una jeringuilla sin aguja.

Añade agua destilada para cubrir el tejido.

Inserta el émbolo, luego sujeta la jeringuilla en posición vertical, golpea y ajusta el émbolo para liberar cualquier aire atrapado.

Sella la punta con parafilm para crear una cámara cerrada para la extracción por apoplasto.

Aplica presión positiva empujando el émbolo hasta que el tejido se oscurece, indicando compresión y entrada de agua en los espacios intercelulares para desplazar bacterias.

A continuación, aplica presión negativa tirando del émbolo para expandir la matriz tisular y extraer líquido y bacterias.

Repite los ciclos de presión para generar fuerzas de corte que interrumpen las microcolonias, liberando bacterias sin dañar el tejido vegetal.

Desprecína la jeringuilla y recoge el fluido apoplásico que contiene bacterias dispersas para su análisis posterior.

Cuatro días después de la inoculación, co