Preparación de películas bacterianas de nanocelulosa a partir de bacterias productoras de celulosa

Toma una microplaca llena de un medio nutritivo que contiene manitol.

Inocular cada pozo con una bacteria productora de celulosa e incubar bajo condiciones estáticas.

Durante la incubación, las bacterias absorben manitol y lo metabolizan en glucosa.

Esta glucosa se transporta a complejos de celulosa sintasa incrustados en la membrana bacteriana y se polimeriza en cadenas de glucano.

Estas cadenas extruyen hacia el espacio extracelular, donde cristalizan en microfibrillas.

Las microfibrillas se agrupan en estructuras en forma de cinta, formando una matriz de nanocelulosa tridimensional.

A medida que se produce más nanocelulosa, se acumula en la interfaz aire-líquido, espesándose en películas gelatinosas moldeadas en la forma del pozo.

Extrae las películas e incubalas en una solución alcalina para lisar las células bacterianas, y luego elimina el medio residual.

Enjuaga las películas repetidamente con agua para eliminar cualquier solución alcalina restante. Guarda las películas en agua para evitar la deshidratación. Luego, esterilizarlos al vapor para asegurar la esterilidad en aplicaciones posteriores.

Transfiere dos mililitros del medio de cultivo líquido a cada pozo de una placa de cultivo de tejido de 24 pozos. Toma dos colonias con una aguja inoculadora de las placas de Petri inoculadas en paso y colócalas en el primer pozo de la placa de cultivo de tejidos. Repite el mismo procedimiento para los 23 pozos restantes.

Incuba la placa de cultivo de tejidos a 30 grados Celsius durante siete días. Esto dará un total de 24 películas BNC con un diámetro de 16 mm y un grosor de aproximadamente 2 a 3 mm. Recoge las películas BNC del medio de crecimiento y esterilizalas en 200 mililitros de una solución de hidróxido de sodio al uno por ciento durante una hora a 50 grados Celsius para eliminar todas las trazas de G. xylinus.

Desecha la solución y añade 200 mililitros de solución recién preparada con hidróxido de sodio del uno por ciento. Repite el mismo proceso una vez más o hasta que las películas BNC en solución adquieran un aspecto translúcido. Enjuaga las películas BNC con agua tres veces y guárdalas en agua de alta pureza a temperatura ambiente.

Asegúrate de que las películas BNC estén completamente sumergidas en el agua y que no se puedan secar en ningún momento. Luego, autoclave las películas BNC a 121 grados Celsius durante 20 minutos.