Aislamiento de endósporas de una muestra ambiental mediante lisis dirigida de células vegetativas

Toma una muestra ambiental que contenga células vegetales y endosporas de una bacteria formadora de endosporas, junto con otras bacterias.

Las endosporas tienen una capa protectora que les ayuda a sobrevivir en condiciones adversas.

Utilizando una unidad de filtración al vacío, filtra la muestra para atrapar las células y endósporas en una membrana.

Coloca la membrana en un plato y córtala en trozos pequeños.

Transfiere los fragmentos a un tubo, añade un amortiguador y agita el tubo para liberar las células y las endosporas.

Incubar con agitación a alta temperatura para debilitar las estructuras celulares vegetales sin dañar las endosporas.

Enfría la muestra, luego añade la lisozima e incuba con agitación. La lisozima altera la pared celular de las células vegetativas, provocando su ruptura.

Añade hidróxido de sodio y un detergente, e incuba para degradar las macromoléculas celulares y los restos, preservando las endósporas resistentes.

Filtra la muestra para aislar las endósporas. Lava las endosporas para eliminar el exceso de reactivos, preparándolas para un análisis posterior.

Una vez que la unidad de filtración y la bomba de vacío han sido preparadas según el protocolo de texto, se util