Bloqueo de replicación mediado por proteínas represoras marcadas fluorescentemente en Escherichia coli
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:09 min. • November 28th, 2025
Tomemos un cultivo de E. coli modificado genéticamente que expresa una matriz operadora de tetraciclina cromosómica (tetO).
Las bacterias también portan un plásmido con un promotor inducible por arabinosa que impulsa la expresión de la proteína represora tetraciclina marcada con YFP.
Transfiere el cultivo a un medio nutritivo enriquecido que contenga antibióticos e incuba con agitación para seleccionar células que contienen plásmidos.
A medida que las células crecen, se forman los reresponsomas que inician la replicación cromosómica del ADN.
En la fase exponencial, recoge una porción como control no inducido.
Añade arabinosa, un inductor, al cultivo restante e incuba ambos cultivos con agitación.
En el cultivo no inducido, el dímero de AraC permanece unido al lazo de ADN, inhibiendo la expresión de los represores.
En el cultivo inducido, la arabinosa se une al dímero AraC, induciendo la expresión del represor.
Las proteínas represoras se unen al conjunto cromosómico tetO, deteniendo la progresión de la horquilla de replicación.
Utiliza microscopía de fluorescencia para observar ambos cultivos.
Los focos fluorescentes en el cultivo inducido de E. coli confirman la obstrucción de replicación m
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