Entrega por electroporación de biomoléculas fluorescentes en células bacterianas

Comienza con una cuveta fría que contiene una suspensión de células bacterianas electrocompetentes, que tienen mayor susceptibilidad a la permeabilización de membranas.

La suspensión también contiene biomoléculas marcadas con fluoróforos orgánicos.

Aplicar un pulso eléctrico de alto voltaje para crear poros temporales de membrana, permitiendo la entrada de la biomolécula en el citoplasma.

Añade un medio rico en nutrientes y transfiere las células a un tubo. Incuba para promover la reparación de membranas.

Centrifuga las células y luego descarta el sobrenadante que contiene biomoléculas no internalizadas.

Resuspende las células en un tampón alto en sal que contiene un detergente para desprender las biomoléculas adheridas a la superficie.

Centrifuga de nuevo, descarta el sobrenadante y vuelve a suspender las celdas del buffer.

Transfiere la suspensión a un filtro y una centrífuga para descartar el flujo que contiene cualquier biomolécula no internalizada. Luego, enjuaga las células con un tampón nuevo y vuelve a suspenderlas.

Monta las celdas sobre una almohadilla de agarosa y coloca una cubierta. Las bacterias marcadas con fluorescencia están listas para ser visualizadas.

Comenzando con un s