Análisis preciso y de alto rendimiento del crecimiento bacteriano usando un lector de microplacas

Comienza con bacterias preservadas en un stock de glicerol, previamente crecidas hasta la fase exponencial temprana para asegurar estados fisiológicos uniformes y crecimiento reproducible.

Añade medio de crecimiento y vórtice para resuspender uniformemente las bacterias.

Diluir en serie la suspensión usando medios frescos para obtener un rango de densidades iniciales de celdas.

Carga las muestras en los pozos interiores de una placa de varios pozos, dejando los pozos de borde llenos con medios en blanco para minimizar la variabilidad relacionada con la evaporación.

Coloque la placa en un lector de microplacas para mantener un movimiento constante y una temperatura óptima para el crecimiento bacteriano.

A medida que las bacterias se multiplican, la densidad óptica o OD del cultivo aumenta.

Mide el OD a intervalos fijos.

Se restan los valores iniciales de OD obtenidos de los pozos en blanco para corregir la absorbancia de fondo.

Luego, calcular la tasa de crecimiento a partir de valores consecutivos de OD medidos en intervalos de tiempo definidos, lo que permite una cuantificación precisa y de alto rendimiento de la dinámica del crecimiento bacteriano.

Para registrar el crecimiento en tiempo