Análisis preciso y de alto rendimiento del crecimiento bacteriano usando un lector de microplacas

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Comienza con bacterias preservadas en un stock de glicerol, previamente crecidas hasta la fase exponencial temprana para asegurar estados fisiológicos uniformes y crecimiento reproducible.

Añade medio de crecimiento y vórtice para resuspender uniformemente las bacterias.

Diluir en serie la suspensión usando medios frescos para obtener un rango de densidades iniciales de celdas.

Carga las muestras en los pozos interiores de una placa de varios pozos, dejando los pozos de borde llenos con medios en blanco para minimizar la variabilidad relacionada con la evaporación.

Coloque la placa en un lector de microplacas para mantener un movimiento constante y una temperatura óptima para el crecimiento bacteriano.

A medida que las bacterias se multiplican, la densidad óptica o OD del cultivo aumenta.

Mide el OD a intervalos fijos.

Se restan los valores iniciales de OD obtenidos de los pozos en blanco para corregir la absorbancia de fondo.

Luego, calcular la tasa de crecimiento a partir de valores consecutivos de OD medidos en intervalos de tiempo definidos, lo que permite una cuantificación precisa y de alto rendimiento de la dinámica del crecimiento bacteriano.

Para registrar el crecimiento en tiempo real, añadir aproximadamente 25 mililitros de M63 a un depósito de reactivo esterilizado. Luego, añade 900 microlitros de M63 a los microtubos en preparación para hacer diluciones en serie. A continuación, añade 900 microlitros de M63 al material de glicerol descongelado y al vórtice.

Transfiere 100 microlitros de la dilución de 10 veces a otro microtubo que contenga 900 microlitros de M63 y vórtice. Repite este paso hasta alcanzar el número deseado de diluciones. Ahora, llena los pozos en el borde de una microplaca de fondo plano esterilizada de 96 pozos con 200 microlitros de M63, usando una pipeta de ocho canales.

Carga 200 microlitros de cada muestra diluida en los pozos de microplacas según la tabla de referencia. Para evitar la asignación de capas debido al calentamiento y la eficiencia de siembra, nunca uses los pozos situados en el borde de la microplaca para tus muestras y carga la misma muestra en varios pozos en diferentes ubicaciones de la microplaca. Coloca la microplaca de 96 pozos en el lector de placas.

Abre Leer ahora en el Administrador de tareas y elige el programa. Haz clic en Aceptar para empezar a medir. Finalmente, guarda la grabación como un nuevo archivo experimental para el análisis de datos.

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Last updated: 11 July 2026