Evaluación de la actividad bacteriana de chaperona mediante el despliegue térmico de una proteína modelo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:38 min. • November 28th, 2025
Comienza colocando una cubetas en un espectrofotómetro de fluorescencia equipado con un soporte y agitador controlados por temperatura.
Añade un tampón precalentado a un pH moderadamente ácido y ajusta la temperatura del soporte para simular condiciones de tensión.
En la muestra de prueba, añade un acompañante protector contra el ácido derivado de E. coli.
En la muestra de control, añade un volumen igual de búfer.
A continuación, introduce una proteína de sustrato sensible a la temperatura y al ácido en ambas muestras.
Empieza a monitorizar la dispersión de la luz.
Incubar las muestras bajo condiciones de estrés para inducir el despliegue del sustrato.
Con un pH moderadamente ácido, la chaperona se activa y estabiliza la proteína no plegada.
Añade una solución salina que neutralice el pH y sigue registrando la dispersión de la luz.
En la muestra control, el retorno al pH neutro provoca que la proteína no plegada se agregue, aumentando la dispersión de la luz.
En la muestra de prueba, el chaperón favorece el replegamiento del sustrato, lo que reduce la dispersión de la luz en comparación con el control.
Compara las señales de dispersión de luz para evaluar la actividad de los acompañantes.
Colo
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