Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:14 min. • November 28th, 2025
Comienza con colonias de una bacteria patógena cultivada en un medio de agar rico en nutrientes.
Elige una sola colonia, lo que garantiza una población genéticamente homogénea de células bacterianas y reduce la variabilidad durante el genotipado.
Utilizando un lazo de inoculación estéril, transfiere la colonia seleccionada a agua ultrapura para minimizar el riesgo de introducir contaminantes en la muestra.
Haz un vórtice en la suspensión para romper la colonia y dispersar las células bacterianas de forma uniforme.
A continuación, calienta la suspensión para alterar la envoltura celular bacteriana, que consiste en la membrana externa, la capa de peptidoglicano y la membrana interna.
Esto provoca que las células bacterianas se lisen y liberen contenido intracelular, incluido el ADN genómico, en el agua.
Centrifuga la suspensión a alta velocidad para separar los restos celulares del ADN genómico.
Transfiere el sobrenadante a un tubo nuevo para la aplicación posterior de genotipado.
Para empezar, utiliza bucles de inoculación estériles para sembrar cultivos puros de Yersinia ruckeri en cualquier tipo de agar adecuado en placas de Petri. Incubar a 22 grados Celsius durante uno o dos días o a 15 grados Celsius durante tres o cuatro días. Después, usando lazos de inoculación, elige una colonia representativa de cada placa de Petri y transfírela a tubos centrífugos de 1,5 mililitros, que contienen 50 microlitros de agua ultra purificada para resuspender.
Un vórtice breve y incubado durante siete minutos en un bloque calefactor a 100 grados Celsius. Luego, centrifugar a 16.000 g durante tres minutos y usar una pipeta para transferir cuidadosamente el ADN plantilla sobrenadante a tubos vacíos de centrifugadora de 1,5 mililitros. Procede al siguiente paso o almacena el ADN a menos 20 grados Celsius.