Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:54 min. • November 28th, 2025
Comienza con un tubo que contiene una comunidad bacteriana sintética que se encuentra comúnmente en la boca humana.
Añade líquido salival simulado que contiene mucina, una glicoproteína y la enzima α-amilasa para imitar el entorno oral, y luego incuba con agitación.
Las bacterias interactúan con la mucina, que favorece la agregación, mientras que la α-amilasa replica las condiciones enzimáticas de la saliva.
Recoge una muestra.
A continuación, introduce líquido gástrico simulado con mucina a un pH ácido para imitar el ambiente estomacal e incuba con agitación.
Las condiciones ácidas matan especies bacterianas sensibles al ácido, pero sobreviven especies bacterianas tolerantes al ácido y recubiertas de mucina y ligeramente tolerantes al ácido.
Recoge otra muestra.
Finalmente, añade líquido intestinal simulado que contenga bicarbonato y sales fisiológicas. Incuba con el sacudido.
El ambiente rico en sal induce estrés iónico, que altera la membrana bacteriana y reduce la viabilidad.
Recoge una muestra final.
Las tres muestras posteriores a la simulación están ahora listas para la evaluación de la viabilidad bacteriana.
Para simular la digestión oral, transfiere 3 mililitros de la comunidad bacteriana en un tubo estéril de 50 mililitros y mézclalos con 3 mililitros de líquido salival simulado o SSF.
Añadir 75 unidades por mililitro de alfa-amilasa de saliva humana tipo 9A y dos gramos por litro de mucina de estómago porcino tipo 2. Incuba la mezcla a 37 grados Celsius y 100 RPM durante dos minutos. Recoge una muestra de 2 mililitros para extracción de ADN y cuantificación por citometría de flujo.
Para simular la digestión gástrica, añade 4 mililitros de líquido gástrico simulado o SGF a 3 mililitros de la bacteria. Usa un molar de HCl para ajustar el pH a 3 si es necesario. Incuba la muestra a 37 grados Celsius y 100 RPM durante dos minutos.
Luego recoge una muestra de 2 mililitros. Para la digestión del intestino delgado, añade 4 mililitros de líquido intestinal simulado o SIF a la bacteria. Utiliza hidróxido de sodio para ajustar el pH si es necesario.
Luego incuba la muestra a 37 grados Celsius y 100 RPM durante dos minutos, y recoge una muestra de 2 mililitros.