Extracción de ADN genómico de tejido foliar vegetal infectado con bacterias patógenas

Toma una hoja infectada con Candidatus liberibacter, una bacteria patógena.

Córtala en trozos, congela rápidamente en nitrógeno líquido y muélila para romper las células vegetales y liberar su contenido, incluidas las bacterias.

Añade un buffer de lisis de núcleos y mezcla bien.

Incubar a alta temperatura para lisar las membranas, liberando ADN genómico de los núcleos de las plantas y células bacterianas.

Añade enzima RNasa, invierte el tubo para mezclarlo e incuba para degradar ARN.

Añade una solución de precipitación de proteínas y mezcla para favorecer la agregación de proteínas. Centrifugar para pelletar proteínas y restos celulares.

Transfiere el sobrenadante a un tubo que contenga isopropanol y mezcle para precipitar el ADN en cadenas visibles. Centrifugadora para pelletar el ADN.

Lava el pellet con etanol para eliminar impurezas, seca al aire y rehidrata el ADN.

Incubar a alta temperatura para solubilizar el ADN y luego cargar una muestra en una microcubeta.

Utilizando un espectrofotómetro, mide la concentración de ADN aislado.

Primero, usa tijeras limpias para cortar una hoja entera fresca de un árbol cítrico y colócala en una bolsa de plástico limpia para bocadillo. Luego, enfría un