Ensayo de superposición de agar blando para detectar la muerte mediada por bacteriocina en Pseudomonas syringae

Comienza con un agar blando fundido y mantenido a una temperatura cálida.

Inocúla un cultivo de Pseudomonas syringae , la cepa de prueba, en el agar.

Luego haz un vórtice breve para distribuir las células de forma uniforme.

Vierte la mezcla sobre una placa de agar solidificada y extiéndela uniformemente.

Cierra la tapa y deja que se solidifique.

Localiza un sobrenadante filtrado en la superficie del agar solidificado.

El sobrenadante contiene bacteriocina, una molécula antibacteriana derivada de una cepa de donante inducida por estrés, P. syringae .

Incuba la placa para permitir el crecimiento bacteriano y la difusión de la bacteriocina a través del agar.

La bacteriocina se une a receptores superficiales específicos de la cepa de prueba y altera su membrana, lo que conduce a la muerte celular.

Esto da lugar a la formación de una zona clara en el agar, indicando la zona donde la cepa de prueba ha sido eliminada por la molécula antibacteriana bacteriocina.

Diluye el cultivo de 1 a 100 KB frescos. Incuba el cultivo durante tres o cuatro horas agitándolo a temperatura ambiente. A continuación, prepara agar de agua esterilizado autoclavando una suspensión de agar en agua ultrapura.

Mantenga el aga