Enriquecimiento selectivo y aislamiento de bacterias marinas degradadoras de petróleo a partir de muestras de agua de mar

Comienza con una muestra de agua de mar que contiene diversas comunidades microbianas, incluyendo bacterias capaces de degradar hidrocarburos.

Realizar diluciones seriadas de la muestra en solución salina para reducir la densidad microbiana.

Añade crudo a agua destilada estéril y agita la mezcla para solubilizar parcialmente los componentes hidrocarburos del aceite.

Deja que la mezcla se asiente, separándola en fracciones de aceite solubles en agua e insolubles en agua.

Prepara placas selectivas de agar utilizando cada fracción de aceite como única fuente de carbono para enriquecer bacterias que degradan hidrocarburos solubles o hidrofóbicos.

Emplata las muestras de agua de mar diluidas sobre el medio selectivo e incuba a temperatura ambiente.

Las colonias que emergen dependen de enzimas como hidroxilasas y dioxigenasas para metabolizar los hidrocarburos.

Elige colonias morfológicamente distintas y reinféctalas sobre medios frescos que contengan la misma fracción de aceite para obtener cultivos puros de bacterias degradadoras de hidrocarburos.

Este método permite el aislamiento selectivo de bacterias marinas que degradan el petróleo.

Para preparar un medio mínimo que contenga una fracción soluble en aceite en agua y una fracción insoluble en aceite y agua como única fuente de carbono, se añade un 1-2 % de crudo a 500 mililitros de agua destilada estéril en un matraz filtrante con una válvula en el fondo. Mantén el matraz bajo agitación constante a 24 a 28 grados Celsius y 150 veces g durante 48 horas. Después de eso, coloca el matraz sobre una superficie estable y espera entre 10 y 20 minutos para que la fracción soluble e insoluble se separe.

Luego abre el matraz inferior del filtro para transferir la fracción soluble en aceite y agua a un nuevo matraz estéril, salvando así la fracción insoluble de aceite y agua. Luego prepara dos botellas de medio de agar mínimo de Bushnell Haas. Autoclave.

Combinado con la fracción soluble en aceite y agua, que es la única fuente de carbono para producir 500 mililitros de medio de agar. Haz lo mismo con la fracción insoluble de aceite y agua y transfiere aproximadamente 25 mililitros de cada medio a placas de Petri individuales. Para aislar bacterias degradadoras de aceite, reutiliza muestras previamente diluidas y pípate 100 microlitros de cada dilución sobre las placas de Petri que contienen medio de agar y emplatábelas.

Recuerda mantener controles negativos para tus placas. Incuba los platos durante uno a tres días a la temperatura objetivo y repite los procedimientos de aislamiento como antes.