Transfección de un sistema de expresión génica inducible en células que expresan una proteína efectora bacteriana
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:43 min. • November 28th, 2025
Analiza células humanas que expresan CaeB, una proteína bacteriana antiapoptótica.
Usa celdas que no tengan CaeB como control.
Introducir un reactivo de transfección complejo con un sistema de expresión génica inducible por tetraciclina que contenga tanto plásmidos reguladores como de respuesta.
El plásmido regulador codifica un activador y silenciador transcripcional, mientras que el plásmido de respuesta codifica una proteína proapoptótica controlada por TRE.
Incubar las células para facilitar la absorción de plásmidos y la expresión reguladora de proteínas.
Sin tetraciclina, el activador permanece inactivo y el silenciador reprime la transcripción impulsada por TRE.
Añade un análogo de tetraciclina e incuba.
El análogo permite la unión activador–TRO, iniciando la expresión proteica pro-apoptótica.
En las células de control, esto desencadena una señalización apoptótica, activando un marcador apoptótico.
En las células que expresan CaeB, CaeB inhibe la señalización apoptótica, reduciendo la activación del marcador.
Una activación reducida de marcadores en células que expresan CaeB sugiere que CaeB inhibe la apoptosis.
Comienza este procedimiento sembrando células HEK293 que expresan de forma
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