Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:35 min. • November 28th, 2025
Comienza con una placa de cultivo que contiene bacterias incrustadas bajo una almohadilla de gel de agarosa para inmovilizar las bacterias y apoyar el crecimiento de una monocapa.
Las bacterias expresan constitutivamente la proteína fluorescente verde, lo que permite un monitoreo en tiempo real de la expresión génica.
Vierte gel adicional de agarosa alrededor de la almohadilla para sellar la muestra y déjala solidificar a temperatura ambiente.
Sella la placa con cinta, perfora para permitir el intercambio de gases y inviertela para evitar condensación.
Incuba la placa a baja temperatura para estabilizar el gel y evitar la división bacteriana.
A continuación, aplica aceite de inmersión sobre el objetivo y coloca la placa sobre un escenario de microscopio confocal.
Iniciar la imagen en time-lapse.
A medida que la GFP madura gradualmente, comienza a fluorescer. Durante la división celular, estas proteínas fluorescentes se distribuyen entre las células hijas, provocando una disminución en la intensidad de fluorescencia.
Esto crea un patrón de fluorescencia en forma de dientes de sierra, y las diferencias en este patrón entre células genéticamente idénticas en el mismo entorno muestran ruido biológico en la expresión génica.
Para obtener imágenes de las muestras, retira el matraz del agua y deja que la solución en gel se enfríe hasta la temperatura corporal. Vierte tres milímetros del gel sobre el perímetro de la placa de muestra. Cuando la agarosa se haya solidificado, sella la placa con cinta y utiliza una aguja calibre 25 para perforar varios agujeros en la cinta.
Luego coloca la placa boca abajo a cuatro grados Celsius durante al menos 30 minutos para permitir que la agarosa se solidifique completamente, evitando la mitosis celular. En un plazo de 24 horas, utiliza un microscopio confocal de fluorescencia para localizar la muestra con la menor ampliación y activar el sistema automático de enfoque del microscopio. Aplica aceite en el objetivo adecuado y utiliza el controlador de plataforma para mover la placa y extender cuidadosamente el aceite.
Luego activa de nuevo el enfoque automático y sigue la sugerencia predeterminada para las secciones transversales escalonadas Z para obtener la imagen de la muestra.